1. Jak zachowa się leucyna w stosunku do jonitu? Jakich zmian należy użyć aby wyeluować ją z kolumny?
leucyna jest amonokwasem obojętnym w pH niskim (kwaśnym) ma łądunek dodatni w pH wysokim ma ładunek ujemny I właśnie ładunkiem sie sugerujemy dobierając jakiś jonit : - kationit (wiaże sie z kationami i wyłapie nam grupoy NH3+ z aminokwasu) - anionit (wiaże się z -"- z COO-) W zadaniu chodziło o rozdzielaniue leucyny i jakiegoś innego związku, prawda? Musisz dobra tak jonit, by zatrzymał Ci np. leucynę (związał sie z nią), a przepuscił ten drugi skadnik. Potem bawisz sie zmieniajacv pH tak, wy wypłukac ten, który pozostał w kumnie na wiczeniach rozdzielalismy cukry (obojętny ładunek) i Leu. stosowany jonit był bez znaczenia, leucyna wiazała się z nim, a cukier schodził z kolumny Potem zmialiśmy pH (np. przy stosowaniu kationitu - czyli związane były gr. NH3+, musimy bardziej zalkalizowac środowisko ==> w wyzszym pH grupy NH3 tracą ładunek)
2. Czy Val, Met, Ile, Leu wychodzą z kolumny w tej właśnie kolejności? Czy może jakoś razem? A jeśli razem to jak je rozdzielić?
1. Co to jest mutarotacja, narysuj odpowiednie wzory. 2. Podaj 3 jakieś tłuszcze (dowolne) i wchodzące w ich skład alkohole. 3. Coś z pI aminokwasów. Chodziło o to gdzie aminokwas jest kationem, gdzie anionem... 4. Zadanko obliczeniowe
zadania z zerową absorbancją.
mamy bialko i jakis enzym rozlozyl to bialko, i pozniej robimy dialize. I mierzylismy absorbancje cieczy poza woreczkiem. I tu bylo pytanie "dlaczego nam wyszlo ze absorbancja tej cieczy jest zero?". jakaś reakcja przeprowadzana. czyli w wyniku reakcji musiały powstać produkty, które nie absorbują światła przy długości fali przy której wykonywano pomiar. Ogólnie rzecz biorąc absorbancję (w zakresie UV-VIS) wykazują związki, które w swojej cząsteczce mają: * ugrupowanie aromatyczne * -N=N- * -N=O * -C≡N * (wiązanie podwójne)C=S
Enzym proteolityczny rozklada bialko... przez godzine (czy tam iles nie ma to znaczenia, chodzi o to ze mial duzo czasu zeby rozlozyc je calkowicie). Nastepnie mieszanine poddajemy dializie (tez ze dlugo i wyczerpujaco) mierzymy absorbancje 280nmi dostajemy zero. Powody? aminowkasy aromatyczne "uciekly" z woreczka dializowego.
byl tez dopisek o tym ze kolorymetr byl sprawny i enzym tez
podac 2 powody i co zrobic by okreslic ktory poprawny. co to jest dializat
Generalnie sposob na powiedzenie ktora z podanych powodow jest dobry.. zmierzyc absorbancje tego drugiego. . . jesli dalej 0,000 to bialko nie mialo aminokw. arom., jesli inna to aminokw. przedializowaly
1. zle warunki reakcji, wiec enzym nie zadzialal, bialko sie nie rozlozylo i nic nie przeszlo przez woreczek 2. druga rzecz jest taka ze bialko moglo sie skladac z aminokwasow ktore nie absorbuja swiatla w podanym zakresie dlugosci fali 3. moglbyc to enzym ktory rozcina tylko niektore wiazania w bialku, i w wyniku reakcji enzymatycznej doszlo do czesciowej hydrolizy, przez woreczek przeszly tylko niektore dobrze zhydrolizowane fragmenty bialka, ktore akurat nie absorbowaly swiatła 4. zle przeprowadzony pomiar, czyli mierzenie absorbancji nie w zakresie w ktorym np aminkwasy aromatyczne absorbuja swiatlo
13. ciężko to tu napisać ale liczy się z prostej proporcji , tyle tylko, ze należy przyjąć chyba, że wzorzec ma stężenie 50 mikrgram/ml reszta prawie analogicznie do ćwiczeń. 13 - musisz wiedziec, ze dla w 1ml wzroca glukozy znajduje sie 50mikrog glukozy robisz wykres prostej wzorcowej i liczyc dla trzy razi wiekszej absorbancji czyli wyjdzie Ci 150 mikrogram glukozy w 1ml roztworu po hydrolizie 17. zasadowej jeżeli chcemy odszczepić tylko KT a zachować resztę wiązań np. glikozydowe, czyli dajmy na to w jakimś mgdg kwaśna kiedy chcemy otrzymać od razu KT które w zasadowej ulegają zmydleniu 18. piszę w kolejności na pierwszą część pytania bo reszta to na podstawi skryptu bez problemu myślę nic się nie stanie kt + glicerolkt + glicerol z galaktozą przyłączoną bo nie hydrolizuje to wiązanie nic niby odda KT ale kwas fosforowy zostaje przy glicerolu
20. Tak, zgadza sie, im mniejsze przesuniecie, mniejszy Rf 22. Myślę, ż emoze to być albo jakiś cukier nieredukujący albo aminokwas. Trzeba będzie na koniec napisać, ze mozna je rozróżnić i podać metodę - np. to co robiliśmy na ćwiczeniach - tj. próbę Molischa i z nihydryną - jest opisane w skrypcie
Ad. 6: pytanie o aminokwas kwaśny i zasadowy w pH=6: Wystarczy machnąć przybliżoną krzywą miareczkowania (lub ją sobie wyobrazić): a) aa (aminokwas) kwaśny będzie występował (przynajmniej w większości...) w formie anionu (zdeprotonowana grupa karboksylowa) ponieważ pH=6 jest sporo powyżej jego pI (pI=3,7), a jak wiemy, aas przyjmują formę jonu obojnaczego w pI (a jesteśmy powyżej!) b) aa zasadowy o pI=7.6 - może wyobraźmy to sobie tak: jesteśmy poniżej pI, a więc sprotonowana będzie grupa NH2 (czyli będzie miał grupę NH3+) ergo występuje w formie kationu. Nie wiem jednak jak to wszystko się ma do protonacji i deprotonacji dodatkowych grup funkcyjnych (nie podają pKa poszczególnych grup funkcyjnych). Dlatego chyba najlepiej pisać o wypadkowym ładunku dodatnim lub ujemnym, lub anionach i kationach. Ad 19 czyli MGDG i inne takie... Chyba na dobry początek trzeba będzie jakoś rozdzielić składniki naszej mieszaniny... Pytanie jak? Chyba pozostaje właściwie tylko chromatografia adsorpcyjna w kolumnie, żeby było najwygodniej. Przy pomocy odpowiednich eluentów (o odpowiedniej sile elucyjnej, stosując je gradientowo) wymywamy: a. najsłabszym eluentem karoteny (bo to takie mało polarne, same łańcuszki, góra podwujne, dwa pierścionki na końcach cząsteczki i parę podstawników metylowych) b. średnim triacyloglicerole (mają ugrupowania estrowe, które są bardziej polarne od wiązań podwójnych i całej reszty, którą miały karoteny) c. najsilniejszym wymywamy MGDG (są w tym układzie najbardziej polarne ponieważ oprócz dwóch ugrupowań estrowych mają jeszcze grupy hydroksylowe, która jest jeszcze bardziej polarna od estrowej). Czyli mamy MGDG. Teraz trza je zhydrolizować, żeby dobrać się do kwasów tłuszczowych. Możemy to zrobić poprzez hydrolizę zasadową prowadzoną w etanolu pod wpływem NaOH. Powstaną nam jednak rozpuszczalne w wodzie (ergo i metanolu mydła). Dlatego jak już to wszystko zrobimy dolewamy wodę i chloroform. Chloroform oczywiście nie miesza się z wodą, więc powstają dwie frakcje: górna - wodna i dolna – CHCl3. Nie mam co do tego pewności, ale nasze mydła będą chyba w wodnej. Teraz dodajemy lekki nadmiar HCl w stosunku do NaOH. Nieznacznie zakwasi nam to środowisko i spowoduje przejście soli kwasów tłuszczowych w kwasy tłuszczowe i ich migrację (tego jestem niepewny) do fazy niepolarnej (chloroformowej), z której je pobieramy. Mamy kwasy tłuszczowe! Teraz wystarczy jedynie zrobić chromatografię cienkowarstwową i porównać nasze Rf –y (typowe dla danej substancji w danym środowisku [rozpuszczalniku]) z wyliczonymi Rf – ami, albo nanieść sobie wzorcowe kwasy na płytkę i potem porównywać gdzie prążki występują na tej samej wysokości => jakie mamy kwasy tłuszczowe.
Pytanko 1 pierwsze to narysowac podany dwucukier. Nastepnie powiedziec, czy ma wlasciwosci redukcyjne. uzasadnic odp. Pytanko 2 podane pK1 i pK2, obliczyc pI, poza tym podane dwa pH jedno mocno kwasne, drugie zasadowe, odp jak sie zachowa aminokwas w tych pH. Odp uzasadnic. Pytanko 3 byly podane rozne dziwne lipidy i mniej dziwne (cholesterol) i trzeba bylo napisac na co sie rozpadna po hydrolizie alkalicznej. Pytanko 4 dotyczylo spektofotometri, problem polegal na hmmm odpowiednim przeliczeniu jednostek.
1. narysuj 1,6-bisfosforan -B-D-fruktofuranozy. Czy zwiazek wykazuje muztarotację? uzasadnij. 2. Jakiego jonitu i jakich zmian pH użyjesz, aby rodzielić lizynę i alaninę? Uzasadnij 3. Uszereguj wg malejącego Rf roziwjane na płytce z MgO związki (rozwijane w układzie eter etylowy:etanol; 98:2): n-heksadekanol; 1,3 - dihydroksyheksadekan; mannozyd n-heksadekanolu; palmitynian n-heksadekanolu. Co się stanie jeśli te ropzuszczalniki będziemy rozwijać w układzie etanol:eter 98:2? 4. Zadanie z absorbancją: dana masa molowa zwiazku (250g/mol); stężenie związku (125mg/ml); absorbancja (0,5) i l=1cm - trzeba policzyć molowy współczynnik absorbancji i wykonać dizałanie, aby jednostki sie zgadzały
Jak rozdzielić 2 aminkokwasy? (Val, Leu;Ser i Glu)
najlepiej chromatografią jonowymienną (bo elektroforezy jeszcze nie było na ćwiczeniach, to nie wiem czy by zaliczyli). Nanosisz aminokwasy na odpowiednie złoże i tak: leucyna i walina nanosisz na anionit przy pH np. 2 i później przy zwiększaniu pH najpierw wyeluujesz walinę a później leucyne. Ananlogicznie z seryną i glutaminą, tylko najpierw wyeluuje się glutamina a później seryna
Lys jest aminokwasem zasadowym i jej pI (ciągle mam ciągoty do tego, żeby napisać Pi...) jest przesunięte w kierunku pH zasadowego (jeśli dobrze liczę to będzie to tak: pK1 =2,2 (aminowa przy C alfa) pK2=10,8 (aminowa nie-alfa) , pK3=9,2 (pKa grupy karboksylowej; uwzględniasz tu pK2 i pK3 ponieważ między nimi znajduje się jon obojnaczy; z równania pI=(pK2+pK3)/2=10 i stąd [dalsza część poza nawiasem]) pI=10; analogicznie dla Val pI=5,45 (żródło: Biochemia Harpera). Różnica od razu widoczna. I wydaje się, że to trzeba wykożystać. Załóżmy, że startujemy w pH ok 7 i teraz nie znając nawet waqrtości pI możesz się spodziewać, że gdzieś koło tego pH Lys będzie dalej kationem a Val conajmniej jonem obojnaczym. Zasada jest taka: STOSUJEMY ODPOWIEDNIE pH, W KTÓRYM JEDEN Z AA JEST KATIONEM LUB JONEM OBOJNACZYM, A DRUGI JONEM PRZECIWNIE NAŁADOWANYM. Jeżeli teraz zastosujesz odpowiedni jonit (kationit) Lys zostanie, a Val wypływa (podobno od jonitu oddysocjowuje już jon obojnaczy - żródło: Ćwiczenia z biochemii). Analogicznie działasz w kolejnym podpunkcie tylko jako, że masz powiedziane, że wyjściowe pH=2, musisz je stopniowo zwiększać
Kiedy stosujemy hydrolizę lipidów zasadową a kiedy kwasową??
Zasadowej - jeżeli chcemy odszczepić tylko KT a zachować resztę wiązań (np. glikozydowe). Rozbija ona tylko wiązania amidowe -C(O)-N i estrowe -C(O)-O-. (te O w nawiasie jest przyłączone do C podwójnym wiązeniem ) Kwaśnej - kiedy chcemy otrzymać od razu KT, które w h. zasadowej ulegają zmydleniu. H. kwaśna rozwala wszystkie wiązania. karoten (wydaje mi się, że cholesterol też) - w zasadowej nic się z nim nie stanie bo wydaje mi się, że nie ma tych wiązań co ona rozwala galaktozyloacyloglicerol - KT + glicerol z przyłączoną galaktozą acyloglicerol - KT + glicerol kwas tłuszczowy - nic się nie stanie fosfatydyloglicerol - KT + glicerol z przyłączonym kw. fosforowym sfingomielina (tu to tylko moja improwizacja) - wydaje mi się, że jedynie odłączy się KT bo jest przyłączony wiązaniem amidowym... reszta zosanie w całości....ale wolałabym, żeby ktoś to sprawdził
zad 1 jesli chodzi, o wspolczynniki przy obliczaniu absorbancji, to mamy: A=K*c*l=c*l*R/M, gdzie K - molowy wspolczynnik ab. R - wlasciwy wsp ab. czyli zaleznosc dwoch wspolczynnikow powinna byc: R=K*M (ale nie wiem, czy tak, czy nie przypadkiem K=R*M) i jesli teraz epsilonem oznaczyli WLASCIWY wsp. ab. to M sie przyda, a jesli chodzi im o MOLOWY wsp. ab. to M jest zbedne
1. Tautomeria cukrów na przykładzie trioz 2. Stereoizomeria kwasu aminooctowego (...a to podchwytliwy zakład ) 3. Całkowita hydroliza zasadowa sfingomieliny...podobnie jak na ćwiczeniach z MGDG, etc. Trzeba było napisać, co po hydrolizie znajdzie się w probówce z chloroformem i H20 w fazie wodnej i pod jaką postacią... narysować jeden ze wzorów produktów hydrolizy. 4. Przeliczanie Cp%... podane Cp roztworu glukozy i V. Odparowało X cm^3 H20. obliczyć nowe Cp. co tu więcej
na przykład beta-D-fruktofuranozylo-2,2-alfa-D-glukopiranozę - czy to ma właściwości redukujące i dlaczego?
Z tą mutarotacją too jest dokładnie tak, jak powiedziałaś: musi być wolny węgiel anomeryczne (tzn. że nic nie może być podstwione pod grupę -OH). Jeżeli węgiel anomeryczny nie jest związany z żadnym podstawnikiem, umożliwia to w każdej chwili otwarcie formy pierścieniowej i przejście w formę łańcuchową. Z formy łańcuchowej natomiast znów moze się zamknąc w pierścień i może zamknąć się tak, że grupa OH bedzie po drugiej stronie płaszczyzny. Czyli ważne jest, by był anomeryczny wolny. I w tych pryzkłądach: ten mój związek - wyakzuje mutarotację, bo dla fruktozy w postaci furanowej węglem anomerycznym jest C2 a nie C1 - C2 jest wolny, mamy mutarotację. A ten długaśny zwiazek, który napisałaś też ma mutarotację - ta zdolność do mutarotacji nie pochodzi jednak od fruktozy (jej węgiel anomeryczny C2 jest zablokowany wiazaniem glizkozydowym z drugiem cukrem) lecz od glukozy (dla glukozy anoemyczny jest C1, który jest wolny). Z właściwościami redukujacymi jest dokładnie tak samo - też musi być węgiel anomeryczny wolny, by mógł sie otworzyć pierścień (i tym ssamym uwolniła sie grupa redukująca - aldehydowa) - czyli te które wykazują mutarotację mają jednocześnie właściwości redukujące.
z2 -> A=cel ; n=m/M ; n=Vc czyli m=Mn=MVc= MVA/el z3 -> tu jest to słynne inne c bo mg/ml czyli w sumie w g/l a nie w molach/litr więc mamy M= m/n = (c wagowe * V) / (cmolowe * V) = cwag / cmol = cwag / (A/e*l) =cwag*e*l / A jednostki: A jest bez jednostki, więc 1 czyli pomijamy g/litr * litr/cm * cm = g lub jak kto woli mg/ml * litr/cm *cm = 1000mg = g (ten 1000 jest ze stosunku ml do l, wybaczcie łopatologię)
g/mol to w sumie gram na jedność czyli gram. Z tego wynika, że w tym zadaniu podali nam znowu jedną daną zbędną, czyli V
Jeżeli stężenie wyrażono w mol/l to wlasciwy współczynnik absorbcji przyjmuje nazwę molowy współczynnik absorbcji czyli e(epsilon).Liczbowo równa się on absorbancji roztworu 1-molowego o grubości warstwy 1cm.Molowy wsp.absorbcji pozwala obiektywnie ocenic czułośc reakcji.z jego wartości można obliczyć stężenie substancji w mol/l ze wzoru c=A/e*l Znając absorbancję roztworu i jego stężenie można obliczyć molowy wsp. absorbcji e dla badanej substancji.Jeżeli stężenie podawano w MIKROGRAMACH/ML to e oblicz się ze wzoru: e=A*1000*masa molowa/c*l jeżeli stężenie podano w MILIGRAMACH/ML pomija sie w liczniku liczbę 1000
jak na sile adsorpcji wplywa wiazanie glikozydowe? jak w ogole ma sie do powiedzmy w. estrowego i karboksylowego?
wiazanie glikozydowe samo w sobie to moze niewiela, ale jak masz na skraju zw doczepiony cukier to masz pare np 5 grup hydrkosylowych w nim, wiec powaznie zwiekszaja one polarnosc zw, a co za tym idzie zmniejszaja Rf
13 pytanie juz tu bylo poruszane, ale postaram sie wyjasnic. -wzorzec Glc ma stez=50mikrog/ml (to trzeba wiedziec) i dana A=0,3, wiec z proporcji policzysz, ze skoro dla naszej Glc A=0,9 to stezenie = 150mikrog/ml - zakladamy ze fruktoza z hydrolizy tautomeryzuje w Glc - to 150 mikrog w ml, a mamy 3ml rozworu, wiec z proporcji wychodzi nam masa Glc po hydrolizie = 450mikrogr - choc rozcienczamy roztwor NaOH i HCl, to masa Glc sie nie zmienia. Mase Scc obliczymy znajac M 2Glc=360g/mol (Scc rozpada sie na 2Glc, ale w tej rekacji wchodzi czasteczka wody, dlatego 2Glc waza wiecej niz 1Scc) i M Scc=342g/mol, liczysz z proporcji: 342 - 360 x - 450 i x to masa Scc przed hydroliza x=427,5mikrog
mozna 13 liczyc z odwrotnosci rozcienczenia, ale tak tez mozna. Wychodzi bodaj tak samo. jesli robic tak jak nam kazali na cwiczeniach, to powinno sie pomnozyc ilosc glukozy razy 3/2 (odwrotnosc rozcienczenia) i razy 0.95 czy jakos tak.200 z hakiem to ci zapewne wyszlo stezenie. Przelicz to na mase i dostaniesz 427,5 i 450.
dlaczego w cwiczeniu 2 - oddzielanie cukrow od aa, aminokwas przyczepil sie do anionitu?? Czy pH nie bylo obojetne? Czy kazdy aa by sie zatrzymal na tym zlozu w tej chromatografii
powiedzcie mi jak to jest z tymi polarnymi i niepolarnymi adsorbentami i uzywanymi rozpuszczalnikami? czy jest jakas zasada tutaj, ze gdy mamy niepolarny/mało polarny albo polarny adsorbent to używamy określonych układów rozpuszczalnikow? bo juz totalnie czuje sie skolowana.. i tak np w a. mamy adsorbent o malej polarnosi [ MgO] i układ rozp. chloroform : metanol. metanol w szeregu eluotropowym jest od chloroformu dalej wiec rozpuszczalnik powinien wymyc te zwiazki dalej.. ale jesli jest jakas zasada i jako że to jest adsorbent malo polarny, a taki uklad [ chloroform : metanol] stosujemy tylko dla tych polarnych, to moze jest na odwrot? w b. jest SiO2 czyli adsorbent polarny.. i znow ta sama zagwozdka. i czy odpowiedź jest taka że: a) zwiazki przesuną się bardziej b) przesuną się mniej
MgO jest BARDZO polarny - w ogóle ma budowę jonową... Mowiąc o adsorbentach lepiej jest jednak mówić o ich sile sorpcyjnej - wartości niosącej inrofmację o tym, jak mocno nasze związki wiążą się z tym naszy adsorbentem. Siła wiązania będzie oczywiście zależała od rodzaju związku - na silnym adsorbencie silniej wiązać się będą substancjie bardziej polarne. Ze względu na siłę sorpcyjną adsorbenty zostały (m.in. na ćwiczeniach i w skrypcie) podzielone na: 1) silne - MgO, Al2O3, węgiel aktywny 2) średnie - silikażel, węglany i fosforany Ca i Mg 3) słabe - ziemia okrzemkowa i Celit. szereg eluotropowy - popularne rozpuszczalniki uszeregowane wg. wzrastającej siły eluotropowej: eter naftowy -> benzen -> chloroform -> eter dietylowy -> octan etylu -> aceton -> etanol -> metanol -> woda czyli np.: eter naftowy ma z wymienionych związków najmniejszą siłę elucyjną, a więc bedzie różne rzeczy z adsorbentu najwolniej wypłukiwał (bo sam ma małą tendencję do wiązania się z adsorbentem (adsorbowania się), więc będzie słabo wypierał rożne rzeczy z miejsc sorpcyjnych) WNIOSKI: 1. te same związki na takiej samej płytce "rozwijanej" układem o większej sile elucyjnej (bardziej polarnym) będą miały większe Rf-y, niż wtedy, gdyby były "rozwijane" układem o mniejszej sile elucyjnej (mniej polarnym) (bardziej polary rozpuszczalnik skuteczniej konkuruje o miejsca sorpcyjne, czyli szybcej wymywa nasz związek z adsorbenta) 2. te same związki "rozwijane" takim samym układem na płytce z silniejszego adserbenta będą miały mniejsze Rf-y niż gdyby ta ich chromatografia była robiona na płytce ze słabszego adsorbenta (nasze związki wiążą się silniej z silniejszym adsorbentem - trudniej je z niego wypłukać)
nie, no wychodzi trochę inaczej... MgO jest adsorbentem silnym, natomiast SiO2 - czyli dwutlenek krzemu - jako adsorbent jest używany w formie żelu krzemionkowego (silikażel), i pod tą nazwą go na biochemii spotykamy... jak pisałem w poprzednim poście - silikażel jest adsorbentem średnim....
1. sacharoza narysuj napisz nazwę czy jest cukrem redukującym i dlaczego 2. naturalne kwasy tłuszczowe opisz, wiazania 3. rodział Lys i sacharozy na kationicie jak i dlaczego 4. zadanko na obliczenie A, było podane ε i l natomiast c: w µg/ml póżniej któego było 10 ml które rozcieńczono
.zadanie na rozdzielenie Lys i Thr w pH=10.5 2.Reakcje barwne cukrow 3.Narysuj cerebrozyd i napisz co wchodzi w jego skład i z jakie wiązania w nim wystepuja 4.Zadanie obliczeniowe,podany milimolowy współczynnkik E=0.1 (dm3/mmol x cm) ,A=0.1,C(w/v)=200mg/ml , l=1 cm i trzeba było obliczyć ciężar czasteczkowy
1. Narysuj alfa-D-fruktofuranoze-2,2-beta-D-mannopiranoze. Czy może zachodzić mutarotacja? 2. Rozdzielanie Arg i Asp 3. Pytanie na absorbancję, gdzie należało policzyć masę molową i wychodziło 50000 [polecam opcję 'Szukaj' na forum, bo jest świetnie opisane] 4. Jedyne trudniejsze: dane są cztery lipidy i cztery Rf. Który jest który? Kolejno były 0,0 0,3[?] 0,7 0,8 Związków nie pamiętam, ale karoten był na pewno. Jeszcze podpytanie - jak możnaby zmienić Rf z 0,0 na większy? Oczywiście podana była mieszanina rozwijająca.
morcys1