04 - 1 - Histopathologie.pdf

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Comprendre la peau
Examens complémentaires
Ann Dermatol Venereol
2005;132:8S89-104
Introduction
cutanées permet d’aboutir d’emblée à un diagnostic
ou un groupe de diagnostics. Cette étape se montre
cependant insuffisante dès que le symptôme est peu discri-
minant (cas des tumeurs par exemple) ou bien parce que le
mécanisme n’est pas univoque (lésions bulleuses par
exemple).
Des explorations paracliniques s’avèrent alors indispen-
sables, soit pour compléter l’étude morphologique à l’éche-
lon du tissu, grâce à l’histologie, ou bien à visée étiologique,
par des examens microbiologiques ou immunologiques.
La peau, organe extériorisé, est particulièrement apte aux
explorations. Plusieurs types d’examens peuvent être réalisés
directement à partir du revêtement cutané.
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D ans un grand nombre de cas, l’analyse des lésions
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Comprendre la peau
Examens complémentaires
Ann Dermatol Venereol
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Histopathologie cutanée :
cytodiagnostic et biopsie cutanée
simples, de réalisation aisée, qui peuvent grandement
contribuer au diagnostic dermatologique à deux
conditions :
– d’une part, de respecter les précautions de prélèvement
nécessaires à une étude morphologique de bonne qualité,
– d’autre part, de choisir précisément les indications, car
tous les diagnostics ne sont pas faits par ces examens.
L’interprétation des comptes rendus apparaît souvent
difficile, étroitement dépendante de la confrontation anato-
moclinique surtout pour les dermatoses non tumorales.
– Le grattage d’une lésion ancienne, datant de plus de
48 heures, est rarement contributif en cas de dermatose
virale aiguë, car l’effet cytopathogène viral n’est plus détectable
en raison de la nécrose secondaire des cellules infectées.
A CHEMINEMENT DANS LE SERVICE D ’ ANATOMIE PATHOLOGIQUE
– Pas de précaution d’acheminement autre qu’un emballage
cartonné ou une pochette protégeant les lames de verre pour
éviter qu’elles soient cassées pendant le transport.
– Remplir une demande d’examen d’anatomie pathologique
en indiquant :
- Nom, prénom, date de naissance du malade
- Service de consultation ou d’hospitalisation.
- Nom du médecin préleveur.
- Date du prélèvement.
- Siège du prélèvement en attribuant une numérotation
différente à chaque lésion si plusieurs lésions ont été prélevées.
- Renseignements cliniques : date d’apparition, aspect
clinique et étendue des lésions, diagnostics envisagés, terrain
particulier, etc.
- Caractère urgent éventuel et numéro de téléphone pour
transmettre le résultat.
- Délai pour l’obtention du résultat : 24 à 48 heures en
moyenne, ou moins d’une heure en cas d’urgence pour un
résultat téléphoné.
Cytodiagnostic cutané
T ECHNIQUE DE PRÉLÈVEMENT
Matériel
– Un vaccinostyle de forme triangulaire à base large, ou une
curette plate.
– 4 à 6 lames de verre.
Procédure
– Aucune application préalable sur la lésion à prélever, ni
anesthésie locale.
– Choisir une lésion vésiculo-bulleuse récente ou une ulcé-
ration de moins de 48 heures, non infectée.
– En cas de lésion vésiculo-bulleuse, ôter le toit de la lésion
avec le bord coupant du vaccinostyle. Gratter le fond et les
bords de la lésion avec le côté du vaccinostyle jusqu’à faire
saigner légèrement le fond.
– Étaler le matériel de grattage sur les lames de verre, en
essayant d’obtenir 4 à 6 lames pour une lésion.
– Laisser sécher les lames à l’air.
– La lésion grattée ne nécessite aucun soin local particulier.
I NDICATIONS ET RÉSULTATS
Dermatoses virales épidermotropes du groupe
herpès-varicelle-zona
Le cytodiagnostic met en évidence l’effet cytopathogène du
virus dans les cellules épithéliales malpighiennes cutanées ou
muqueuses : gigantisme cellulaire, multinucléation et inclu-
sions caractérisant les cellules ballonisantes de Unna (fig. 1) .
Il est positif dans des lésions récentes non remaniées
datant de moins de 48 heures en cas d’herpès, de varicelle
ou de zona.
Les faux négatifs sont dus le plus souvent au caractère trop
tardif du prélèvement et aux remaniements nécrotiques et
inflammatoires.
En cas d’infection virale chronique chez les sujets immu-
nodéprimés, le cytodiagnostic est pratiquement toujours
positif, même sur des lésions anciennes, du fait de la
persistance locale du virus.
Précautions pratiques
– La réalisation du prélèvement est très bien supportée par
les patients sauf sur des ulcérations muqueuses parfois
douloureuses.
– Le grattage d’une lésion sèche, croûteuse, est voué à l’échec
par absence de cellules analysables sur les étalements.
– Le grattage d’une lésion infectée ramène un matériel
inflammatoire et nécrotique qui ne permet pas une bonne
étude cytologique.
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L a biopsie cutanée et le cytodiagnostic sont des gestes
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Histopathologie cutanée : cytodiagnostic et biopsie cutanée
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La fiabilité du cytodiagnostic est grande quand il est cor-
rectement effectué, et les faux positifs sont exceptionnels.
En aucun cas, il ne permet de distinguer le type de virus
en cause, herpès 1, herpès 2, ou varicelle-zona : l’effet
cytopathogène est identique pour tous les virus de ce groupe.
Le typage précis du virus nécessite un prélèvement virolo-
gique.
représentatives de la dermatose : bulle d’apparition récente
et non remaniée par des phénomènes inflammatoires ou
nécrotiques ou par une surinfection.
Biopsie cutanée
P RINCIPES GÉNÉRAUX
Dermatoses bulleuses auto-immunes avec acantholyse
(groupe des pemphigus)
Le cytodiagnostic met en évidence le phénomène d’acantho-
lyse qui est bien caractéristique en cas de pemphigus
vulgaire, mais plus difficile à reconnaître en cas de pemphigus
superficiel (fig. 2) .
Les cellules malpighiennes acantholytiques ont un gros
noyau hyperchromatique entouré d’un halo clair contrastant
avec la basophilie du cytoplasme plus condensé en périphérie
près de la membrane plasmique.
Les difficultés d’interprétation cytologique sont plus nom-
breuses que pour les lésions virales, surtout sur les
muqueuses où les remaniements inflammatoires modifient
l’aspect des cellules épithéliales.
La réalisation pratique d’une biopsie cutanée peut se faire
selon trois méthodes :
– biopsie au punch (dont le diamètre varie de 2 à 6 mm),
– biopsie au bistouri,
– biopsie chirurgicale profonde.
Les modalités de fixation du fragment cutané au moment
du geste biopsique conditionnent les possibilités techniques
ultérieures.
Dans la plupart des cas, il suffit d’immerger le frag-
ment dans une solution aqueuse à 10 p. 100 de formol
tamponné.
Quand la biopsie est de petite taille, d’épaisseur inférieure
à 1 cm, et susceptible d’être acheminée dans un délai de
24 heures, la fixation dans le liquide de Bouin aqueux reste
une excellente procédure pour la technique histologique de
routine.
Les autres modalités initiales de prélèvement sont la
congélation, soit immédiate dans l’azote liquide, soit diffé-
rée par immersion dans un milieu de transport le liquide de
Bens Michel, ou beaucoup plus rarement la fixation en
glutaraldéhyde.
Remarques
– Le cytodiagnostic à la recherche d’un pemphigus reste un
examen d’orientation diagnostique.
– Il doit être complété par une biopsie de bulle et une biopsie
péribulleuse pour étude en immunofluorescence afin
d’obtenir un diagnostic de certitude pour débuter le traite-
ment (corticothérapie par voie générale).
– Quand le pemphigus est connu, le cytodiagnostic permet
de confirmer une récidive, surtout sur une muqueuse plus
difficile à biopsier, et d’adapter le traitement.
T ECHNIQUES DE PRÉLÈVEMENT
Autres dermatoses vésiculo-bulleuses et pustuleuses
Le cytodiagnostic négatif permet d’éliminer les étiologies
précédentes (herpès-varicelle-zona et pemphigus) à condition
d’avoir effectué un prélèvement correct sur des lésions
Choix du site biopsique
Dermatoses inflammatoires : choisir une lésion récente,
non remaniée par des phénomènes de surinfection ou par
de la nécrose.
Fig. 1. Cytodiagnostic : cellules ballonisantes de Unna
Fig. 2. Cytodiagnostic : cellules acantholytiques
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Examens complémentaires
Ann Dermatol Venereol
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Pathologie tumorale : prélever en bordure, à cheval sur la
peau normale et la zone tumorale, ou dans une zone non
remaniée de la tumeur.
Formol (tamponné à 10 p. 100)
• Indications
– Étude histologique standard.
– Fragment biopsique dont l’épaisseur dépasse 1 cm.
• Avantages
– Permet une conservation prolongée des tissus.
– À utiliser quand les délais d’acheminement dépassent
24 heures ou lorsque la biopsie est susceptible de nécessiter
des études complémentaires ultérieures non déterminées au
moment du prélèvement.
– Permet de nombreuses techniques complémentaires :
histochimie, immunohistochimie (marqueurs tumoraux,
sauf les sous-populations lymphocytaires), hybridation in
situ et PCR in situ .
• Inconvénients
– Temps de fixation plus long (12 à 24 heures).
– Liquide incolore qui risque d’être confondu avec d’autres
solutés (eau, sérum physiologique, etc.).
Procédure
• Anesthésie locale
– Une injection de xylocaïne à 1 p. 100 (1 à 3 ml).
– Dans les territoires où existe un risque de saignement,
utiliser de la xylocaïne adrénalinée à 1 à 2 p. 100 en respec-
tant les contre-indications : jamais d’adrénaline si la biopsie
est faite sur les extrémités, doigts, orteils, oreilles, nez, verge.
– Attendre 5 minutes.
– Biopsie au bistouri : elle nécessite une suture.
– Biopsie au punch : le diamètre du punch varie de 2 à
6 mm ; à partir de 4 mm, il faut un point de suture.
Précautions particulières
– La biopsie d’une lésion profonde hypodermique ou d’un
nodule sous-cutané est réalisée au bistouri de préférence.
– La biopsie profonde avec un punch est possible à condition
de couper avec des ciseaux longs la base du fragment avant
de l’extirper.
Glutaraldéhyde
• Indications
– Étude en microscopie électronique.
– Les applications diagnostiques sont très limitées en
pratique dermatologique.
– La durée de la technique est longue et le délai de réponse
dépasse souvent un mois.
• Procédure
– L’immersion doit impérativement être faite sur le lieu du
prélèvement sans aucun délai et les fragments biopsiques ne
doivent pas dépasser 1 mm de côté.
– En pratique il faut se procurer au préalable le fixateur auprès
du service d’anatomie pathologique ou du service d’histologie
et l’y acheminer dans un délai inférieur à une heure.
C ONDITIONS D ’ ACHEMINEMENT ET CHOIX DU FIXATEUR
Un fixateur est un milieu qui préserve les structures tissu-
laires pour l’étude morphologique ultérieure. Selon les
structures à étudier, le conditionnement de la biopsie sera
différent.
Le choix du liquide d’immersion du fragment biopsique
doit être impérativement décidé au moment du prélèvement
selon l’étude à laquelle est destinée la biopsie : une fixation
inadaptée rend le prélèvement inutilisable et imposera de la
refaire.
Liquide de Bouin (aqueux)
• Indications
– Étude histologique standard.
– Fragment biopsique de moins de 1 cm d’épaisseur.
• Avantages
– Action rapide : une fixation de quelques heures est suffi-
sante.
– Permet de techniquer rapidement la biopsie : à utiliser en
cas de résultat urgent.
– Identification aisée du liquide de couleur jaune.
– Permet les techniques complémentaires usuelles : histo-
chimie et la plupart des marqueurs immunohistochimiques.
• Inconvénients
– Durcissement des tissus : ne pas dépasser 24 heures de
fixation.
– Empêche quelques techniques particulières : certains mar-
queurs immuno-histochimiques (collagène IV, CD34) et
toutes les techniques d’hybridation in situ et de PCR in situ .
Congélation
• Indications
– Recherche de dépôts d’immunoglobulines et/ou de
compléments extracellulaires (sur les membranes basales)
par une technique d’immunofluorescence utilisant des anti-
corps anti-Ig7, IgG et anti-C3.
– Étude des sous-populations lymphocytaires (phénotypes)
par une technique d’immunoperoxydase utilisant des anti-
corps anti-pan B (CD20) et anti-pan T (CD3), anti-CD30.
• Procédure
– Étude en immunofluorescence directe : le fragment biop-
sique est mis dans un petit tube sec en plastique dur pourvu
d’un bouchon vissé résistant à la congélation.
– Étude des sous-populations lymphocytaires : le fragment
biopsique est directement placé dans le tube à congélation
selon la même technique.
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