Api.pdf

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® 10 S

IVD

Système d'identification des Enterobacteriaceae et autres bacilles à Gram négatif non fastidieux

INTRODUCTION ET OBJET DU TEST

API 10 S est un système standardisé pour l’identification

des Enterobacteriaceae et autres bacilles à Gram négatif

non fastidieux, comprenant 11 tests biochimiques

miniaturisés, ainsi qu'une base de données. La liste

complète des bactéries qu'il est possible d'identifier avec

ce système est présente dans le Tableau d'Identification

en fin de notice.

PRECAUTIONS D'UTILISATION

x Pour diagnostic in vitro et pour contrôle micro-

biologique.

x Pour usage professionnel uniquement.

x Ce coffret contient des composants d'origine animale.

La maîtrise de l'origine et/ou de l'état sanitaire des

animaux ne pouvant garantir de façon absolue que ces

produits ne contiennent aucun agent pathogène

transmissible, il est recommandé de les manipuler avec

les précautions d'usage relatives aux produits

potentiellement infectieux (ne pas ingérer; ne pas

inhaler).

x Les prélèvements, cultures bactériennes et produits

ensemencés doivent être considérés comme poten-

tiellement infectieux et doivent être manipulés de façon

appropriée. Les techniques aseptiques et les

précautions usuelles de manipulation pour le groupe

bactérien étudié doivent être respectées tout au long de

la manipulation ; se référer à "CLSI/NCCLS M29-A,

Protection of Laboratory Workers from Instrument

Biohazards and Infectious Disease Transmitted by

Blood, Body Fluids, and Tissue ; Approved Guideline -

Révision en vigueur". Pour informations

complémentaires sur les précautions de manipulation,

se référer à "Biosafety in Microbiological and Biomedical

Laboratories- CDC/NIH - Dernière édition", ou à la

réglementation en vigueur dans le pays d'utilisation.

x Ne pas utiliser les réactifs après la date de péremption.

x Avant utilisation, s'assurer de l'intégrité de l'emballage

des différents composants.

x Ne pas utiliser de galeries ayant subi une altération phy-

sique : cupule déformée, sachet déshydratant ouvert, …

x Les performances présentées sont obtenues avec la

méthodologie indiquée dans cette notice. Toute dé-

viation de méthodologie peut altérer les résultats.

x L'interprétation des résultats du test doit être faite en

tenant compte du contexte clinique ou autre, de l'origine

du prélèvement, des aspects macro et microscopiques

de la souche et éventuellement des résultats d'autres

tests, en particulier de l'antibiogramme.

PRINCIPE

La galerie API 10 S comporte 10 microtubes contenant

des substrats déshydratés. Les microtubes sont inoculés

avec une suspension bactérienne qui reconstitue les

tests. Les réactions produites pendant la période

d'incubation se traduisent par des virages colorés

spontanés ou révélés par l'addition de réactifs.

La lecture de ces réactions se fait à l'aide du Tableau

de Lecture et l'identification est obtenue en consultant la

liste des profils de la notice ou à l'aide d'un logiciel

d'identification.

PRESENTATION (Coffret de 50 tests)

- 50 galeries API 10 S

- 50 boîtes d'incubation

- 50 fiches de résultats

- 1 barrette de fermeture

- 1 notice

COMPOSITION DE LA GALERIE

La composition de la galerie API 10 S est reportée dans le

Tableau de Lecture de cette notice.

REACTIFS ET MATERIEL NECESSAIRES MAIS NON

FOURNIS

Réactifs

- API NaCl 0,85 % Medium, 5 ml (Réf. 20 230) ou

API Suspension Medium, 5 ml (Réf. 20 150)

- Réactifs : TDA (Réf. 70 402)

JAMES (Réf. 70 542)

NIT 1 + NIT 2 (Réf. 70 442)

- Oxydase (Réf. 55 635*)

* référence non commercialisée dans certains pays :

utiliser un réactif équivalent.

- Huile de paraffine (Réf. 70 100)

- Logiciel d'identification api web TM (Réf. 40 011)

(consulter bioMérieux)

Matériel

- Pipettes ou PSIpettes

- Protège-ampoule

- Portoir pour ampoules

- Equipement général de laboratoire de bactériologie

CONDITIONS DE STOCKAGE

Les galeries API 10 S sont présentes dans une poche en

aluminium avec sachets déshydratants.

Après ouverture de celle-ci (*), conserver les galeries

restantes avec les déshydratants en refermant la poche à

l'aide de la barrette de fermeture (présente dans le

coffret) : placer l'extrémité de la poche entre les deux

pièces de la barrette et les clamper soigneusement, à

fond, sur toute leur longueur. Les galeries peuvent ainsi

être conservées 10 mois après ouverture de la poche ,

à 2-8°C (ou jusqu'à la date limite d'utilisation indiquée sur

l'emballage, si celle-ci est antérieure).

(*) Recommandation pour l'ouverture de celle-ci : couper

juste en dessous de la soudure, en maintenant la poche

droite, pour éviter d'endommager les sachets déshydra-

tants.

bioMérieux ® SA

Français - 1

api ® 10 S

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ECHANTILLONS (PRELEVEMENT ET PREPARATION)

API 10 S ne doit pas être utilisé directement à partir des

prélèvements d'origine clinique ou autres.

Les microorganismes à identifier doivent dans un premier

temps être isolés sur un milieu de culture adapté selon les

techniques usuelles de bactériologie.

LECTURE ET INTERPRETATION

Lecture de la galerie

x Après incubation, la lecture de la galerie doit se faire en

se référant au Tableau de Lecture.

x Noter sur la fiche de résultats toutes les réactions

spontanées.

x Révéler les tests nécessitant l'addition de réactifs :

- Test TDA : ajouter 1 goutte de réactif TDA. Une cou-

leur marron-rougeâtre indique une réaction positive

à noter sur la fiche de résultats.

- Test IND : ajouter 1 goutte de réactif JAMES. Une

couleur rose diffusant dans toute la cupule indique

une réaction positive à noter sur la fiche de résultats.

- Test NO 2 : ajouter 1 goutte des réactifs NIT 1 et NIT 2

dans le tube GLU. Attendre 2 à 5 minutes. Une

coloration rouge indique une réaction positive à

noter sur la fiche de résultats.

NOTE : Les tests de réduction des nitrates et de la

production d’indole doivent être réalisés en dernier, car

ces réactions libèrent des gaz qui risquent d’altérer

l’interprétation d’autres tests de la galerie. Ne pas

remettre le couvercle d’incubation après l’ajout de ces

réactifs.

Interprétation

L'identification est obtenue à partir du profil numérique .

x Détermination du profil numérique :

Sur la fiche de résultats, les tests sont séparés par

groupes de trois et une valeur 1, 2 ou 4 est indiquée

pour chacun. La galerie API 10 S comportant 10 tests,

en additionnant à l'intérieur de chaque groupe les

valeurs correspondant à des réactions positives, un

profil numérique à 4 chiffres est obtenu. (La réaction de

l'oxydase constitue le 11 ème test et la réduction des

nitrates en nitrites (NO 2 ) le 12 ème ).

x Identification :

Elle est réalisée à partir de la base de données (V3.1)

* à l'aide du profil numérique :

- Rechercher le profil dans la liste de la notice.

* à l’aide du logiciel d'identification api web TM :

- Entrer manuellement au clavier le profil numérique à

4 chiffres.

MODE OPERATOIRE

Test oxydase

Le test oxydase doit être réalisé selon les instructions du

fabricant, il constitue le 11 ème test d’identification à noter

sur la fiche de résultats.

Préparation de la galerie

x Réunir fond et couvercle d'une boîte d'incubation et

répartir environ 3 ml d'eau distillée ou déminéralisée [ou

toute eau sans additif ou dérivés susceptibles de libérer

des gaz (Ex : Cl 2 , CO 2 ...)] dans les alvéoles pour créer

une atmosphère humide.

x Inscrire la référence de la souche sur la languette

latérale de la boîte. (Ne pas inscrire la référence sur le

couvercle, celui-ci pouvant être déplacé lors de la

manipulation.)

x Sortir la galerie de son emballage.

x Placer la galerie dans la boîte d'incubation.

NOTE : API 10 S doit être utilisé avec des

Enterobacteriaceae et/ou des bacilles à Gram négatif non

fastidieux. Les microorganismes fastidieux, exigeants et

nécessitant des précautions de manipulation particulières

(ex. Brucella et Francisella ) ne font pas partie de la base

de données API10S. Il convient d'utiliser d'autres

techniques pour exclure ou confirmer leur présence.

Préparation de l'inoculum

x Ouvrir une ampoule d'API NaCl 0,85 % Medium (5 ml)

ou une ampoule d'API Suspension Medium (5 ml)

comme indiqué au paragraphe "Précautions" de la

notice du produit, ou utiliser un tube contenant 5 ml

d'eau physiologique stérile ou d'eau distillée stérile,

sans additif.

x A l'aide d'une pipette ou d'une PSIpette, prélever une

seule colonie bien isolée sur milieu gélosé. Utiliser

préférentiellement des cultures jeunes (18-24 heures).

x Réaliser une suspension bactérienne en homo-

généisant soigneusement les bactéries dans le milieu.

Cette suspension doit être utilisée extemporanément.

NOTE : la plupart des espèces de Vibrio sont halophiles.

En cas de suspicion d'un Vibrio , réaliser la suspension

bactérienne dans API NaCl 0,85 % Medium.

Inoculation de la galerie

x Introduire la suspension bactérienne dans les tubes de

la galerie à l'aide de la même pipette (pour éviter la

formation de bulles au fond des tubes, poser la pointe

de la pipette ou de la PSIpette sur le côté de la cupule,

en inclinant légèrement la boîte d'incubation vers

l'avant) :

- pour le test CIT , remplir tube et cupule,

- pour les autres tests, remplir uniquement les tubes (et

non les cupules),

- pour les tests : LDC , ODC , H 2 S , URE, créer une

anaérobiose en remplissant leur cupule d'huile de

paraffine.

x Refermer la boîte d'incubation.

x Incuber à 36°C ± 2°C pendant 18-24 heures.

7 504 Klebsiella pneumoniae ssp pneumoniae

D’autres tests supplémentaires peuvent être proposés en

cas de faible discrimination. Se référer au logiciel.

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CONTROLE DE QUALITE

Les milieux, galeries et réactifs font l'objet de contrôles de qualité systématiques aux différentes étapes de leur

fabrication. Un contrôle bactériologique des tests de la galerie est de plus réalisable par l’utilisateur avec la souche

1. Escherichia coli ATCC ® 25922 de préférence ou l’une des souches suivantes :

2. Enterobacter cloacae

ATCC 13047

4. Stenotrophomonas maltophilia

ATCC 51331

3. Proteus mirabilis

ATCC 35659

ATCC : American Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Manassas, VA 20110-2209, USA.

ONPG GLU

ARA

LDC

ODC

CIT

H 2 S

URE

TDA

IND

NO 2

–

Profils obtenus après 18-24 H d'incubation, après culture des souches sur gélose Trypcase Soja au sang de mouton

Il est de la responsabilité de l'utilisateur de s'assurer que le contrôle de qualité est mis en oeuvre conformément à la

législation locale en vigueur.

LIMITES DU TEST

x Le système API 10 S est destiné à l’identification des

Enterobacteriaceae et bacilles à Gram négatif non

fastidieux les plus fréquemment rencontrés dans des

prélèvements cliniques ou autres (voir Tableau

d’Identification en fin de notice), et à eux seuls.

x Des tests complémentaires sont parfois nécessaires

pour séparer deux espèces. Pour choisir l’une de ces

espèces, il faudra tenir compte du contexte clinique ou

autre, de l’origine du prélèvement, des aspects micro et

macroscopisques de la souche et éventuellement des

résultats d’autres tests, ainsi que des valeurs des

pourcentages d’identification (% ID) et de l’indice de

typicité (T) (Ex : pour un prélèvement clinique, une faible

discrimination entre Escherichia coli et Serratia odorifera

orientera vers Escherichia coli , surtout si les % ID et

valeur de l’indice T sont élevées et en faveur de cette

espèce, E. coli étant fréquent et S. odorifera très rare

dans les prélèvements cliniques). La galerie API 20 E

qui comporte 10 tests complémentaires, peut être

utilisée pour des identifications plus approfondies. Dans

ce cas, les microorganismes peuvent être identifiés à

l’aide du Catalogue Analytique API 20 E.

x Seules des cultures pures contenant un seul type de

microorganisme doivent être utilisées.

PERFORMANCES

x Enterobacteriaceae

4775 souches de diverses origines et souches de

collection appartenant aux espèces de la base de

données ont été testées :

- 94,01 % des souches ont été correctement identifiées

(avec ou sans tests complémentaires).

- 2,03 % des souches n'ont pas été identifiées.

- 3,96 % des souches ont été mal identifiées.

x autres bacilles à Gram négatif non fastidieux

1286 souches de diverses origines et souches de

collection appartenant aux espèces de la base de

données ont été testées :

- 95,72 % des souches ont été correctement identifiées

(avec ou sans tests complémentaires).

- 1,48 % des souches n'ont pas été identifiées.

- 2,80 % des souches ont été mal identifiées.

ELIMINATION DES DECHETS

Eliminer les réactifs utilisés ou non utilisés ainsi que les

matériels à usage unique contaminés en suivant les

procédures relatives aux produits infectieux ou

potentiellement infectieux.

Il incombe à chaque laboratoire de gérer les déchets et

les effluents qu'il produit selon leur nature et leur

dangerosité, et d'en assurer (ou faire assurer) le

traitement et l'élimination selon les réglementations

applicables.

RESULTATS ATTENDUS

Se référer au Tableau d'Identification en fin de cette

notice pour les résultats attendus des différentes

réactions biochimiques.

bioMérieux ® SA

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api ® 10 S

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TABLEAU DE LECTURE

TESTS COMPOSANTS ACTIFS

QTE

(mg/cup.)

REACTIONS/ENZYMES

RESULTATS

NEGATIF

POSITIF

ONPG

2-nitrophényl-ßD-

galactopyranoside

0,223

ß-galactosidase

(Ortho-NitroPhényl-ßD-

Galactopyranosidase)

incolore

jaune (1)

GLU

D-glucose

1,9

fermentation / oxydation (GLUcose) (3)

bleu / bleu-vert

jaune / jaune-gris

ARA

L-arabinose

1,9

fermentation / oxydation (ARAbinose) (3)

bleu / bleu-vert

jaune

LDC

L-lysine

1,9

Lysine DéCarboxylase

jaune

rouge / orangé

ODC

L-ornithine

1,9

Ornithine DéCarboxylase

jaune

rouge / orangé

CIT

trisodium citrate

0,756

utilisation du CITrate

vert pâle / jaune bleu-vert / bleu (2)

H 2 S

sodium thiosulfate

0,075 production d'H 2 S

incolore / grisâtre

dépot noir /

fin liseré

URE

urée

0,76

UREase

jaune

rouge / orangé

TDA / immédiat

TDA

L-tryptophane

0,38

Tryptophane DésAminase

jaune

marron-rougeâtre

JAMES / immédiat

IND

L-tryptophane

0,19

production d'INDole

incolore

vert pâle / jaune

rose

(voir notice du test

oxydase)

cytochrome-OXydase

(voir notice du test oxydase)

NIT 1 + NIT 2 / 2-5 min

NO 2

(tube GLU)

production de NO 2

jaune

rouge

(1) Une très légère couleur jaune est également positive.

(2) Lecture dans le cupule (zone aérobie).

(3) La fermentation commence dans la partie inférieure des tubes, l'oxydation commence dans la cupule.

x Les quantités indiquées peuvent être ajustées en fonction des titres des matières premières.

x Certaines cupules contiennent des composants d’origine animale, notamment des peptones.

TABLEAU D'IDENTIFICATION p. I

LISTE DES PROFILS NUMERIQUES p. II

BIBLIOGRAPHIE

p. IV

TABLE DES SYMBOLES

p. V

ATCC est une marque utilisée, déposée et/ou enregistrée appartenant à American Type Culture Collection.

bioMérieux ® SA

au capital de 12 029 370 €

673 620 399 RCS LYON

69280 Marcy-l'Etoile / France

Tél. 33 (0)4 78 87 20 00

Fax 33 (0)4 78 87 20 90

http://www.biomerieux.com

bioMérieux, Inc

Box 15969,

Durham, NC 27704-0969 / USA

Tél. (1) 919 620 20 00

Fax (1) 919 620 22 11

Imprimé en France

bioMérieux, le logo bleu, API et api web sont des marques utilisées, déposées et/ou enregistrées appartenant à

bioMérieux SA ou à l’une de ses filiales.

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Identification system for Enterobacteriaceae and other non-fastidious Gram-negative rods

SUMMARY AND EXPLANATION

API 10 S is a standardized identification system for

Enterobacteriaceae and other non-fastidious Gram-

negative rods, which uses 11 miniaturized biochemical

tests and a database. The complete list of those

organisms that it is possible to identify with this system is

given in the Identification Table at the end of this package

insert.

WARNINGS AND PRECAUTIONS

x For in vitro diagnostic use and microbiological

control.

x For professional use only.

x This kit contains products of animal origin. Certified

knowledge of the origin and/or sanitary state of the

animals does not totally guarantee the absence of

transmissible pathogenic agents. It is therefore

recommended that these products be treated as

potentially infectious, and handled observing the usual

safety precautions (do not ingest or inhale).

x All specimens, microbial cultures and inoculated

products should be considered infectious and handled

appropriately. Aseptic technique and usual precautions

for handling the bacterial group studied should be

observed throughout this procedure. Refer to

"CLSI/NCCLS M29-A, Protection of Laboratory Workers

from Instrument Biohazards and Infectious Disease

Transmitted by Blood, Body Fluids, and Tissue ;

Approved Guideline - Current revision". For additional

handling precautions, refer to "Biosafety in

Microbiological and Biomedical Laboratories- CDC/NIH -

Latest edition", or to the regulations currently in use in

each country.

x Do not use reagents past the expiry date.

x Before use, check that the packaging of the various

components is intact.

x Do not use strips which have been damaged : cupules

deformed, desiccant sachet open, etc.

x The performance data presented were obtained using

the procedure indicated in this package insert. Any

change or modification in the procedure may affect the

results.

x Interpretation of the test results should be made taking

into consideration the patient history, the source of the

specimen, colonial and microscopic morphology of the

strain and, if necessary, the results of any other tests

performed, particularly the antimicrobial susceptibility

patterns.

PRINCIPLE

The API 10 S strip consists of 10 microtubes containing

dehydrated substrates. These tests are inoculated with a

bacterial suspension which reconstitutes the media.

During incubation, metabolism produces color changes

that are either spontaneous or revealed by the addition of

reagents.

The reactions are read according to the Reading Table

and identification is obtained by consulting the list of

profiles in this package insert or using the identification

software.

CONTENT OF THE KIT (Kit for 50 tests)

- 50 API 10 S strips

- 50 incubation boxes

- 50 result sheets

- 1 clip seal

- 1 package insert

COMPOSITION OF THE STRIP

The composition of the API 10 S strip is given in the

Reading Table of this package insert.

REAGENTS AND MATERIAL REQUIRED BUT NOT

PROVIDED

Reagents

- API NaCl 0.85 % Medium, 5 ml (Ref. 20 230) or

API Suspension Medium, 5 ml (Ref. 20 150)

- Reagents : TDA (Ref. 70 402)

JAMES (Ref. 70 542)

NIT 1 + NIT 2 (Ref. 70 442)

- Oxidase (Ref. 55 635*)

* reference not sold in certain countries : use an

equivalent reagent.

- Mineral oil (Ref. 70 100)

- api web TM Identification software (Ref. 40011)

(consult bioMérieux)

STORAGE CONDITIONS

The API 10 S strips are supplied in an aluminum pouch

with desiccant sachets.

Once opened (*), the pouch should be re-sealed using the

clip seal (included in the kit) to preserve the remaining

strips with the desiccant sachets : place the open end of

the pouch along the seal and carefully clamp between

the two parts. The strips may then be kept for up to

10 months after the pouch has been opened , at 2-8°C

(or until the expiry date indicated on the packaging, if this

comes before).

(*) Recommended method for opening the pouches : cut

open the pouch just below the seal while holding the

pouch upright, in order to avoid damaging the desiccant

sachets.

Material

- Pipettes or PSIpettes

- Ampule protector

- Ampule rack

- General microbiology laboratory equipment

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