Sprawozdanie IVPozyskiwanie mikroorganizmów o znaczeniu przemysłowym.
1. Pobranie próbek ze środowiska:
Zostało pobrane 5 g gleby leśnej i rozcieńczono je 45 pf buforu.
2. Testy na produkcję enzymów:
Podłoże
10-4
10-5
10-6
Agar z trybutyryną
Ujawniły się grzyby i bakterie posiadające lipazy i hydrolizujące:
Bakterie: białe i żółte wypukłe kolonie, gładki brzeg, okrągłe,
Grzyby: Małe szarobrązowo-białe plechy
Bakterie posiadające lipazy: 4
Grzyby posiadające lipazy: 10
Podobnie jak w rozcieńczeniu 10-4
Grzyby posiadające lipazy: 1
Wyrosły grzyby niehydrolizujące:
biała, watowata duża plecha.
Agar mleczny
Wyrosły bakterie i grzyby posiadające proteazy.
Bakterie:
okrągłe, jasnożólte kolonie, brzeg gładki,
białe, małe gładkie, kolonie
Grzyby: mała, biała zamszowa plecha
Bakterie posiadające proteazy: 4
Grzyby posiadające proteazy: 2
Podobnie jak w rozcieńczeniu 10-4Bakterie posiadające proteazy: 1
Ujawniły się bakterie i grzyby nie posiadające protez:
Bakterie: brzeg falowany, strzępiony, kolor beżowy
Grzyby: watowata duża grzybnia powietrzna.
Podłoże Watsmana
Oprócz małych koloni pojawiła się jedna wielka kolonia bakterii prawdopodobnie rodzaju Bacillus
Bakterie posiadające amylazy: 3
Grzyby posiadające amylazy:1
Ujawniły się bakterie i grzyby nie posiadające amylaz:
Tabela 1 Z otrzymanych wyników można odczytać, że bakterii i grzybów nie posiadających badanych przez nas enzymów było więcej w badanej próbce niż tych, które je posiadały. Świadczy o tym ujawnienie się tych bakterii i grzybów dopiero na płytkach z najmniejszym rozcieńczeniem, gdzie prawdopodobnie nie było już szukanych przez nas organizmów. Na płytkach o mniejszych rozcieńczeniach organizmy posiadające szukane przez nas enzymy wyparły inne drobnoustroje. Stało się tak dlatego, że jako źródło węgla mogły one wykorzystywać metabolity reakcji katalizowanych tymi enzymami.
· Ogólna liczba drobnoustrojów posiadających lipazy: 14
Liczba bakterii w 1 cm3:
· Ogólna liczba drobnoustrojów posiadających proteazy: 14
Ziarniaki G +Pałeczki G-
Laseczki G+
Promieniowce (prawdopodobnie)
Ziarniaki G+Pałeczki G-
Pałeczki G-
Drożdże (prawdopodobnie)
Ziarniaki G+
Tabela 1 Wyizolowane mikroorganizmy posiadające dane enzymy- barwienie Gramma
Przykładowe gatunki, które mogliśmy wyizolować:
· Bakterie posiadające proteazy:
Bacillus subtilis,
Pseudomonas aeuroginoza,
Streptomyces griseus,
· Grzyby posiadające proteazy:
Aspargilius flavus,
A. oryzae
A. fumigatys
· Bakterie posiadające lipazy:
Bacilius
Micrococcus casteolyticus- prawdopodobne po porównaniu cech makroskopowych koloni- żółte, małe, gładkie brzegi
Pseudomonas nitroreducens
· Grzyby posiadające lipazy:
Rhizopus lipolitycus
Aspargilius niger
Penicillium
· Bakterie posiadające amylazy:
Bacilius subtilis
Bacilius licheniformis
Enterobacter megaterium
· Grzyby posiadające amylazy:
Aspargilius oryzae A. avamori Rhizopus delmar
3. Test selekcyjny- metoda gradientu stężeń:
Bakterie: braki wzrostu na całej wielkości pożywki
Grzyby: wzrost na połowie płytki w której stężenie Pb2+ było najmniejsze.
Plecha grzyba była watowata, biało-szaro-brązowa, duża, nie została wydzielona żadna substancja.
Pod mikroskopem można było widzieć sporangiofor, rozszerzającą się na szczycie kolumienkę, okrąglą kolumellę uwypuklającą się do zarodni. Po budowie i środowisku życia można wnioskować, że grzyb ten to Mucor sp., albo Apsidia sp.
Powołując się na literaturę, możemy przypuszczać, że wyizolowany gatunek to Apsidia coerulea, która wiąże ołów 351 mg/g s. m.
Wnioski:
Bakterie obecne w ziemi leśnej nie tolerują ołowiu w pożywce, natomiast grzyby są bardziej oporne na wyższe stężenia ołowiu. Ale mimo wszystko obecność tego metalu ciężkiego doprowadza do zmian w morfologii grzyba. Z obserwacji makroskopowej można wywnioskować, że plecha grzyba jest mniejsza niż normalnie, bardziej zbita w kierunku malejącego stężenia Pb2+. Po obserwacji mikroskopowej stwierdzamy, że zarówno konidia jak i strzępki grzyba są mniejsze niż normalnie.
Gariel