Chromatografia - Wstep.pdf - CHROMATOGRAFIA - namida

1. Wstęp

Konieczność rozdzielania makromolekuł pojawiła się wraz z rozwojem wiedzy na temat

budowy materii. Szczeglne w tym zakresie miejsce zajmują potrzeby podyktowane rozwojem

wiedzy o materii ożywionej, ze względu na konieczność zachowania aktywności biologicznej

izolowanych makrocząsteczek, niezbędnej dla dalszego postępowania poznawczego.

W najwcześniejszych pracach nad strukturą i składem komrek stosowano, z dużym

powodzeniem, metody zaczerpnięte z laboratorium chemicznego, polegające na sekwencyjnej

ekstrakcji wybranych związkw chemicznych ze skomplikowanej mieszaniny wieloskładnikowej.

Ekstrakcja wzbogacana była przez selektywne wytrącanie związkw chemicznych (precypitację)

oraz frakcjonowanie podziałowe. Metody te do dziś nie straciły swego znaczenia, choć na bazie

ich osiągnięć rozwinęły się nowe techniki separacji makromolekuł, takie jak elektroforeza i

chromatografia cieczowa. Techniki te dają doskonałe rezultaty zarwno w zakresie prac

analitycznych jak i w skali preparatywnej, przy czym chromatografia cieczowa znacznie

przewyższa techniki elektroforetyczne tak w skali procesu preparatywnego, jak i w

zaawansowaniu technicznym i technologicznym. Aktualny stan wiedzy dotyczącej technik

chromatografii cieczowej, w zakresie zastosowań do separacji biomolekuł, można znaleźć w

doskonałej pracy zespołowej (1), redagowanej przez Jan-Christer JansonÓa oraz Lars RydenÓa.

Techniki elektroforetyczne opisane są rwnie interesująco w wyżej cytowanej pracy oraz,

znacznie szerzej, w monografii Reinera Westermeiera (2), dotyczącej wspłcześnie stosowanych

metod i technik elektroforetycznych.

Niniejsze opracowanie nie stanowi konkurencji w stosunku do cytowanych wyżej pozycji,

ale w dużej mierze opiera się na zawartych tam informacjach. Jest prbą syntetycznego zebrania

najważniejszych informacji o złożach i technikach stosowanych w chromatografii cieczowej oraz

zilustrowania ich licznymi przykładami zastosowań, opartymi na opublikowanych metodach

i wynikach badań. Przykłady te zostały tak pomyślane i przygotowane, aby nawet mało

doświadczony badacz mgł w krtkim czasie powtrzyć eksperyment i w następnej kolejności

poszerzyć go o dodatkowe aspekty, istotne dla prowadzonych przez niego badań. Jako dodatkowy

element wspomagający rozwiązywanie rzeczywistych problemw badawczych, pozwalający

praktycznie bez nakładw finansowych doskonalić strategię separacji biomolekuł, polecam prosty

program komputerowy The protein purifier (3).

Jako podstawę do przeglądu aktualnie dostępnych złż i gotowych kolumn oraz

podstawowego sprzętu do chromatografii przyjęto aktualny (na 1999 rok) katalog firmy

Amersham Pharmacia Biotech.

Ilustracje prezentujące aparaturę i sprzęt stosowane w chromatografii cieczowej pochodzą

z rżnych materiałw promocyjnych firmy Amersham Pharmacia Biotech i reprodukowane są za

jej zgodą. Nazwy własne produktw firmy Amersham Pharmacia Biotech zaznaczone są w

tekście opracowania wytłuszczonym drukiem.

Chromatogramy i histogramy zawarte w niniejszym opracowaniu przygotowane zostały na

podstawie przetworzonych komputerowo danych eksperymentalnych uzyskanych w

rzeczywistych warunkach opisanych w poszczeglnych przykładach.

W zakończeniu wstępu chcę podziękować Dyrektorowi polskiego przedstawicielstwa firmy

Amersham Pharmacia Biotech, Panu Andrzejowi Reńskiemu, za zaproszenie do przygotowania

tego opracowania, oraz dr Annie Janiak i dr Markowi Wełnickiemu za przeczytanie tekstu

i cenne uwagi.

1.2. Literatura

1. Janson J-C., Ryden L. Î editors. Protein Purification - Principles, High Resolution Methods

and Applications, 2 nd edition, J. Wiley & Sons. Inc., New York 1988.

2. Westermeier R. Electrophoresis in Practice, 2 nd edition, A Wiley company, Weinheim

1997.

3. The protein purifier Î edukacyjny program komputerowy firmy Amersham Pharmacia

Biotech.

Chromatografia - Wstep.pdf

Plik z chomika:

Inne pliki z tego folderu:

Inne foldery tego chomika: