PCR, Sekwencjonowanie.pdf

PCR,

Sekwencjonowanie

Reakcja PCR

(Polymerase Chain Reaction)

• Najczulsza metoda służąca do wykrywania

i powielania fragmentów DNA o określonej

sekwencji.

• Pozwala na wykrycie i amplifikację

pojedynczej kopii interesującej sekwencji

z preparatu DNA całkowitego.

Składniki mieszaniny reakcyjnej

• Termostabilna polimeraza DNA

• Para syntetycznych oligonukleotydów

jako startery syntezy DNA

• Trójfosforany deoksynukleotydów

• Kationy dwuwartościowe (Mg 2+ )

• Bufor o pH 8.3-8.8

• Kationy jednowartościowe (K + )

• Matryca DNA

Polimeraza DNA

przyłącza

nukleotydy

do końca 3’ – tzn.

katalizuje reakcję

wydłużania

w kierunku 5’→3’

Główne etapy reakcji PCR:

• Denaturacja wyjściowych cząsteczek DNA

• Wiązanie starterów (annealing)

• Wydłużanie łańcucha (extension)