PRZEPISY DO ĆWICZEŃ Z BIOCHEMII dla studentów Wydziału Lekarskiego.pdf

AKADEMIA MEDYCZNA IM. PROF. F. SKUBISZEWSKIEGO

W LUBLINIE

KATEDRA BIOCHEMII I BIOLOGII MOLEKULARNEJ

PRZEPISY DO ĆWICZEŃ Z BIOCHEMII

dla studentów Wydziału Lekarskiego

POD REDAKCJĄ

PROF. NADZW. DR HAB. MARTY STRYJECKIEJ-ZIMMER

LUBLIN 2004

Opracowanie skryptu:

Rozdziały: 1, 2, 3, 18

prof. nadzw. dr hab. Marta Stryjecka-Zimmer

Rozdziały: 4, 5, 6, 9, 10, 11

dr Danuta Suchożebrska-Jesionek

Rozdziały: 7, 8, 19

dr Ewa Nowosadzka-Gromaszek

Rozdziały: 12, 13, 14, 15

dr Wiesława Ogrodnik

Rozdziały: zasady BHP, 16, 17, 20

dr Stanisława Szymonik-Lesiuk

SPIS TREŚCI

ZASADY BEZPIECZEŃSTWA I HIGIENY PRACY W LABORATORIUM ............... 7

ROZDZIAŁ I

OGÓLNE WŁAŚCIWOŚCI FIZYKO – CHEMICZNE BIAŁEK ................................... 9

• Próby barwne: wykrywanie wiązania peptydowego oraz niektórych aminokwasów.

• Porównanie składu aminokwasowego albuminy i żelatyny.

• Denaturacja białek: działanie silnych kwasów, soli metali ciężkich, podwyższonej

temperatury i rozpuszczalników organicznych.

• Dializa

• Równowaga Gibbsa-Donnana

ROZDZIAŁ II

WYSALANIE I ILOŚCIOWE OZNACZANIE BIAŁK A ............................................... 16

• Frakcjonowanie białek osocza za pomocą wysalania.

• Ilościowe oznaczanie stężenia białka metodą biuretowa

• Wysalanie hemoglobiny

ROZDZIAŁ III

METODY STOSOWANE DO ROZDZIAŁU BIAŁEK .................................................. 19

• Rozdział elektroforetyczny białek surowicy krwi na żelu poliakryloamidowym

• Sączenie molekularne białek w żelu Sephadex – rozdzielenie hemoglobiny i błękitu

metylenowego

• Odsalanie roztworu albuminy w żelu Sephadex

• Rozpuszczalność białek w punkcie izoelektrycznym, wyznaczanie Pi

dla kazeiny

ROZDZIAŁ IV

WARUNKI DZIAŁANIA ENZYMÓW ............................................................................. 23

• Wpływ pH na aktywność amylazy ślinowej

• Wpływ temperatury na aktywność amylazy ślinowej

• Wpływ aktywatorów i inhibitorów na aktywność amylazy

• Enzymatyczny rozkład skrobii

• Oznaczanie aktywności amylazy we krwi lub moczu metoda Wolgemutha

ROZDZIAŁ V

KINETYKA REAKCJI ENZYMATYCZNYCH ............................................................. 27

• Wyznaczanie energii aktywacji reakcji enzymatycznej

• Oznaczanie stałej Michaelisa dla inwertazy

ROZDZIAŁ VI

UTLENIANIA BIOLOGICZNE. OKSYDOREDUKTAZY ............................................ 33

• Preparatyka i oznaczanie dehydrogenazy bursztynianowej

• Wykrywanie oksydazy fenolowej w ekstrakcie z ziemniaka

• Wykrywanie peroksydazy próbą indofenolową

• Próba na katalazę.

ROZDZIAŁ VII

OGÓLNE WŁAŚCIWOŚCI I IDENTYFIKACJA CUKRÓW ....................................... 40

• Reakcje barwne i próby redukcyjne na cukry: (próba Molischa, próba Fehlinga, próba

Benedicta, proba Nylandera, próba Barfoeda, próba Seliwanowa, próba Biala, próba

jodowa)

• Schemat różnicowania cukrów

• Stopniowa hydroliza skrobii i wykrywanie produktów jej degradacji

ROZDZIAŁ VIII

CUKRY ZŁOŻONE,GLIKOPROTEINY. BUDOWA I WŁAŚCIWOŚCI ................... 45

• Preparatyka i hydroliza glikogenu

• Badanie aktywności fosforylazy z wyciągu ziemniaka, fosforoliza skrobii

• Izolacja i charakterystyka mucyny

• Oznaczanie ilościowe kwasu sjalowego w surowicy krwi metodą rezorcynolową wg

Svennerholma

ROZDZIAŁ IX

WŁAŚCIWOŚCI FIZYKO-CHEMICZNE TŁUSZCZÓW. TRAWIENIE LIPIDÓW.

ANALIZA ŻÓŁCI. ............................................................................................................... 49

• Emulgowanie i rozpuszczalność tłuszczów. Wykrywania glicerolu-próba akroleinowa

• Wykrywanie kwasów tłuszczowych- reakcja zmydlania

• Wykrywanie nienasyconych kwasów tłuszczowych

• Oznaczanie liczby jodowej

• Oznaczanie liczby kwasowej

• Trawienie tłuszczów lipazą trzustkową

• Wpływ żółci na aktywność enzymów lipolitycznych

• Wykrywanie kwasów żółciowych

• Wykrywanie barwników żółciowych

• Wykrywanie cholesterolu

ROZDZIAŁ X

LIPIDY ZŁOŻONE – FOSFOLIPIDY .............................................................................. 55

• Preparatyka lecytyn

• Wykrywanie składników lecytyny: glicerolu - próba akrpleinowa, kwasów

tłuszczowych – reakcja zmydlania, choliny i fosforu

ROZDZIAŁ XI

STEROIDY ........................................................................................................................... 57

• Wykazanie obecności cholesterolu w mózgu

• Oznaczanie ilościowe cholesterolu w surowicy

• Wykrywanie cholesterolu w surowicy metoda chromatografii cienkowarstwowej

ROZDZIAŁ XII

SOK ŻOŁĄDKOWY ........................................................................................................... 60

• Oznaczanie pH soku żołądkowego

• Oznaczanie wolnego kwasu solnego oraz kwasoty całkowitej soku żołądkowego.

• Oznaczanie deficytu kwasu solnego w soku żołądkowym

• Wykrywanie kwasu mlekowego mlekowego soku żołądkowym

ROZDZIAŁ XIII

ENZYMY PROTEOLITYCZNE ....................................................................................... 64

• Oznaczanie kinetyki działania trypsyny za pomocą miareczkowania formolowego

• Wykazanie aktywności podpuszczki

• Badanie proteolitycznej aktywności pepsyny

• Trawienie kazeiny pepsyną w środowisku kwaśnym

• Badanie proteolitycznej aktywności trypsyny

• Trawienie żelatyny przez trypsynę

• Trawienie kazeiny trypsyną w środowisku alkalicznym

ROZDZIAŁ XIV

PRZEMIANA POŚREDNIA AMINOKWASÓW ............................................................ 69

• Preparatyka transaminazy alaninowej (ALAT) z wątroby

• Oznaczanie aktywności transaminazy alaninowej

• Ilościowe oznaczanie zawartości mocznika w surowicy krwi

ROZDZIAŁ XV

CHARAKTERYSTYKA KWASÓW NUKLEINOWYCH ............................................. 72

• Preparatyka kwasu deoksyrybonukleinowego z wątroby

• Charakterystyka DNA (wykrywanie fosforanów, zasad purynowych i deoksyrybozy)

• Preparatyka kwasu rybonukleinowego rybonukleinowego z drożdży

• Charakterystyka RNA (wykrywanie fosforanów, zasad purynowych i pentoz)

• Oznaczanie stężenia kwasu moczowego w surowicy krwi

ROZDZIAŁ XVI

WITAMINY I SKŁADNIKI MINERALNE ..................................................................... 78

• Badanie rozpuszczalności karotenoidów w tłuszczach i rozpuszczalnikach

organicznych

• Wykrywanie witaminy A i D w tranie z wątroby dorsza

• Fluorymetryczne wykrywanie tiaminy (witaminy B1)

• Fluorymetryczne wykrywanie i badanie właściwości oksydoredukcyjnych ryboflawiny

(witaminy B2)

• Ilościowe oznaczanie witaminy C w ziemniaku /cebuli

• Ilościowe oznaczanie wapnia w surowicy krwi

ROZDZIAŁ XVII

HORMONY .......................................................................................................................... 87

• Wykrywanie estrogenów metodą Kobera

• Wykrywanie 17-ketosteroidów próbą Zimmermanna

• Ilościowe oznaczanie testosteronu

• Oznaczanie aktywności fosfatazy zasadowej (AP) metoda Kinga-Armstronga

ROZDZIAŁ XVIII

ANALIZA CHEMICZNA KRWI ....................................................................................... 94

• Badanie wpływu czynników fizycznych fizycznych chemicznych na trwałość

erytrocytów

• Wykazanie złożonego charakteru hemoglobiny

• Wykrywanie anhydrazy węglanowej w erytrocytach

Plik z chomika:

Inne pliki z tego folderu:

Inne foldery tego chomika: